组织培养学习
2021/10/9 23:02:30
本文主要是介绍组织培养学习,对大家解决编程问题具有一定的参考价值,需要的程序猿们随着小编来一起学习吧!
准备工作
每次操作前都要记得提前灭菌,如
1.播种前,准备灭菌水,配套的M0盒子,枪头,离心管,培养皿灭菌时,橡皮筋绕三圈,150ml瓶子配100ml,不宜过多
2.摇菌前,准备灭菌20mlPU瓶,滤纸,M1,DM,枪头,培养皿,LB
第一阶段:灭菌,播种
-
2ml离心管装40粒种子,加75%酒精,盖盖翻转,浸泡1min,种子多可用更大容器
-
用移液器吸掉酒精,加入适量50%的84消毒液,盖盖翻转,浸泡3-5min(种子污染重可适当延长)
-
吸掉消毒液,加入无菌水洗5遍,,1min颠倒20次,保持离心管内无菌
-
用灭菌镊子将灭菌种子播种到M0
-
黑暗培养5天左右
第二阶段,摇菌
(提早准备需要的灭菌物品:20ml玻璃瓶)
-
播种第五天后摇菌,准备好菌液,冰盒,LB,玻璃瓶,枪头,枪
-
播种5天后用液体LB培养目标细菌,20ml玻璃瓶:4ml抗性LB+10微升目标农杆菌,于28度摇床中培养约14-16h
-
注意。农杆菌在培养液中繁殖速度与其活性有关,在对数期活性最好,最能侵染植物,所以要严格计算接种时间,可以间隔2h重复摇菌,如pm6:00,pm8:00摇菌,次日8:00挑选合适浓度,防治浓度过高。摇菌钱要挑选阳性单克隆菌落,在抗性平板上接种细菌,28度培养48h,阳性目标细菌会在平板上长单菌落,此时用10微升枪头吸取单菌落在培养液中反复吸打几次,菌就可以生长了。
(1个PU瓶-接种1个单皿-转到2-3个方盒)
第三阶段,外植体制备和侵染
-
第六天或第七天 外植体的制备及侵染
-
准备好共培养培养基M1,培养基快冷时加入乙酰丁香酮(AS)(100ml加100微升)备用
-
分光光度计测菌液OD值,LB中0.4左右最好(0.2-0.5可以),一般摇菌12-14h。
-
准备菌液,吸2ml培养好的菌液到无菌离心管中,6000rpm3min。离心弃掉上清,再加2mlDM(AS+)悬浮,放4度冰箱备用(DM是M4不加琼脂粉)
-
在无菌平皿中加入18mlDM(AS+),用无菌剪刀剪取下胚轴到平皿中,每个0.8-1cm,每皿150-200个。(切时一刀垂直切下)(约2-3个方盒)
-
在切好的外植体中导入刚才准备的2mlDM菌液,用无菌镊子轻轻家去外植体到无菌滤纸上放置片刻(晾干农杆菌,防止侵染过度),目的是吸走外植体表面多余的菌液,然后再将外植体转到M1培养基中,暗光下24度培养,
第四阶段,转M2
1.暗光下共培养36-48h后转到M2中,光下正常培养(24度白天,16hs、8hs晚上)
(1瓶M1可以倒-23-24皿,1瓶M2可以倒-13皿)
第五阶段,转M3
- 约第28天,将外植体转移到M3中,每2-3周继代一次,直到出现绿芽(紫)最后将有完整生长点的绿芽转入M4培养基
- 约2次M3后会有较多绿芽,M4上生根需要20天
- 总计大概3个月
这篇关于组织培养学习的文章就介绍到这儿,希望我们推荐的文章对大家有所帮助,也希望大家多多支持为之网!
- 2024-10-05小米13T Pro系统合集:性能与摄影的极致融合,值得你升级的系统ROM
- 2024-10-01基于Python+Vue开发的医院门诊预约挂号系统
- 2024-10-01基于Python+Vue开发的旅游景区管理系统
- 2024-10-01RestfulAPI入门指南:打造简单易懂的API接口
- 2024-10-01初学者指南:了解和使用Server Action
- 2024-10-01Server Component入门指南:搭建与配置详解
- 2024-10-01React 中使用 useRequest 实现数据请求
- 2024-10-01使用 golang 将ETH账户的资产平均分散到其他账户
- 2024-10-01JWT用户校验课程:从入门到实践
- 2024-10-01Server Component课程入门指南