AAT Bioquest丨Caspases酶底物及抑制剂方案

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什么是胱天蛋白酶？

胱天蛋白酶（Caspases）是含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶，它们是为细胞凋亡的主要介质。多种受体，例如TNF-α 受体，FasL受体，TLR和死亡受体，以及Bcl-2和凋亡抑制剂（IAP）蛋白家族参与并调节该caspase依赖性凋亡途径。一旦Caspase受到上游信号（外部或内在）刺激被激活，即会参与执行下游蛋白底物的水解作用，并触发一系列事件，导致细胞分解，死亡，吞噬作用和细胞碎片的清除。

艾美捷AAT Bioquest：

反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；

荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。

新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；

开发用于信号转导研究的试剂；

生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。

AAT Bioquest 人Caspases酶

人的Caspases家族基于序列相似性和生物学功能等共性主要可分为三大类：类由具有长胱天蛋白酶募集结构域的“炎症”胱天蛋白酶组成，他们对P4位上的较大的芳香族或疏水性残基具有亲和力。第二类由具有短的前体结构域的“细胞凋亡效应”胱天蛋白酶组成，而第三类由具有长的前提结构域的Pap位置具有亮氨酸或缬氨酸底物亲和力的“凋亡引发剂”胱天蛋白酶组成。

启动器Caspase和效应器Caspase酶

根据其在凋亡胱天蛋白酶途径中的作用，胱天蛋白酶可分为两类：启动器和效应器Caspase酶。启动器和效应器Caspas酶都具有由小亚基和大亚基组成的催化位点，Caspase酶的识别位

凋亡启动器Caspase酶，例如caspase-2，-8，-9和-10可以启动caspase激活级联反应。Caspase-8对于形成死亡诱导信号复合物（DISC）是必不可少的，并且在激活后，Caspase-8激活下游效应子Caspase（例如Caspase 3）并介导线粒体中细胞色素c的释放。Caspase-8已被证明对IETD肽序列具有相对较高的底物选择性。凋亡效应胱天蛋白酶例如Caspase-3，-6和-7虽然不负责启动级联途径，但是当被激活时，它们在级联的中间和后续步骤中起着不可或缺的作用。Caspase-3（CPP32 / apopain）是关键效应器，因为它放大了来自启动器Caspase的信号，使用对Caspase-3有选择性的DEVD肽序列对活化的Caspase-3进行检测，可以检测Caspase-3的活性。

AAT Bioquest丨Caspase酶底物和抑制剂

Caspase底物和抑制剂由两个关键成分组成：Caspase识别序列和信号产生或蛋白酶抑制基序。

Caspase的底物及其序列

多肽 氨基酸序列 对应的Caspase的种类

IETD Ile-Glu-Thr-Asp Caspase 8，颗粒酶B

DEVD Asp-Glu-Val-Asp Caspase 3、6、7、8或10

LEHD Leu-Glu-His-Asp Caspase 9

VAD Val-Ala-Asp Caspase 1、2、3、6、8、9或10

Caspase酶的显色底物

底物 Caspase 吸收（nm） 颜色 规格 货号

Ac-DEVD-pNA * CAS 189950-66-1 * 半胱天冬酶3 405 nm 黄色 5 mg 13405

Z-DEVD-pNA 半胱天冬酶3 405 nm 黄色 5 mg 13422

Z-IETD-pNA * CAS 219138-21-3 * 半胱天冬酶8，颗粒酶B 405 nm 黄色 5 mg 13413

AAT Bioquest丨Caspase的荧光底物

Caspase的荧光底物的结构包含与半胱天冬酶识别相关的荧光团，例如7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）， Rhodamine 110（R110）或ProRed?620。R110的Caspase底物比基于香豆素的Caspase底物（例如AMC和AFC）更敏感，但由于两步裂解过程，其动态范围更窄。 建议将R110标记的Caspase底物用于终点法测定，而将AMC和AFC标记的 Caspase底物用于动力学测定。

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